Hedgehog信号通路在人角膜缘微环境来源的基质干细胞中表达情况的研究
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国家自然科学基金(No.81200661); 湖北省自然科学基金(No.2013CFB084)


Hedgehog signaling pathway in the mesenchymal stem cells derived from human limbal niche
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Fund Project:

National Natural Science Foundation of China(No.81200661); Natural Science Foundation of Hubei Province(No. 2013CFB084)

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    摘要:

    目的:探讨Hedgehog信号通路在人角膜缘微环境来源的基质干细胞(LNC)中的表达情况。

    方法:对贴壁生长的人角膜缘来源的基质干细胞(LNC)进行分离培养及传代,对骨髓间充质干细胞系(BMMSC)进行培养传代。通过将BMMSC作为阳性对照,采用Western blot技术,免疫荧光技术,real-time PCR技术从蛋白水平及基因水平验证Hedgehog信号通路成员SHH,patched,SMO,Gli-1在LNC中的表达情况。最后采用Cell Count Kit-8 检测不同浓度Gli抑制剂GANT61(空白,1,5,10,15,20,25,30μmol/L)处理LNC和BMMSC48h后的增殖抑制效应反向验证Hedgehog信号通路在LNC中的存在。

    结果:Western blot技术,免疫荧光技术,real-time PCR技术均证明LNC细胞表达Hedgehog信号通路中的Gli-1,patched, SMO,且Gli蛋白抑制剂GANT61可以显著抑制LNC细胞增殖(P<0.05)。

    结论:Hedgehog信号通路在LNC细胞的增殖过程中发挥重要作用。

    Abstract:

    AIM: To investigate the expression of Hedgehog signaling pathway in the mesenchymal stem cells derived from human limbal niche(LNCs).

    METHODS: Culture and passage the mesenchymal stem cells derived from LNCs and bone marrow-derived mesenchymal stem cells(BMMSCs)in vitro. Using BMMSCs as a positive control, the expression of Hedgehog signaling pathway in LNCs was evaluated by Western blot, immunofluorescence and real-time PCR. Furthermore, different doses(1, 5, 10, 15, 20, 25, 30μmol/L)of GANT61(the Gli inhibitor)effect on the proliferation of LNCs and BMMSCs was detected by Cell Count Kit-8.

    RESULTS:The results of Western blot, immunofluorescence and real-time PCR proved that LNCs expressed Gli-1, patched and SMO, which are the members of Hedgehog signaling. In addition, GANT61(the Gli inhibitor)inhibited the proliferation of LNCs significantly(P<0.05).

    CONCLUSION:Hedgehog signaling pathway plays an important role in the proliferation of LNCs.

    参考文献
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    引证文献
引用本文

王娟,李贵刚,李飞,等. Hedgehog信号通路在人角膜缘微环境来源的基质干细胞中表达情况的研究.国际眼科杂志, 2015,15(4):567-571.

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  • 收稿日期:2014-06-16
  • 最后修改日期:2015-03-18
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  • 在线发布日期: 2015-04-08
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